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大肠杆菌沙门氏菌等微生物检验解析

发布时间:2024-03-08        浏览次数:4        返回列表
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大肠杆菌沙门氏菌等微生物检验解析
01、什么是微生物?


微生物是肉眼看不见或看不清楚的,是广泛存在于自然界中,形体微小、数量繁多,需借助于光学显微镜或电子显微镜放大数百倍、上千倍才能观察到的低等生物体。


02、微生物特点

· 微生物是结构简单、繁殖快、分布广、个体最小的生物;

· 结构简单:微生物多数是单细胞,有的具有细胞构造,有的甚至没有细胞构造;

· 生长旺,繁殖快(大肠杆菌在它的适宜37-44℃之间,20-30分钟繁殖一代);

· 分布广、种类多(10万多种):自然界中到处都有,如水、空气、土壤等;

· 个体小:小于0.1mm,肉眼不可见;

· 适应性强,易变异;

· 代谢强,转化快。

03、微生物分类


·真核细胞型微生物——细胞核分化程度高,有核膜和核仁,细胞器完整。如真菌。 


·原核细胞型微生物——细胞核的分化较低,仅有原始核,无核膜、核仁。细胞器很不完善。DNA和RNA同时存在。这类微生物众多,有细菌、放线菌、支原体、衣原体、立克次体、螺旋体。 


·非细胞型微生物——是最小的微生物一类微生物。无典型的细胞结构,只能在活细胞内生长繁殖。核酸类型为DNA或RNA。病毒属之。

4、微生物实验室常规仪器设备


·电子天平:0.1g;0.01g;

·pH计;

·加热装置:电炉、微波炉;

·高压灭菌锅

·高压锅灭菌检测产品

  1、压力灭菌指示卡(121℃);

  2、生物指示剂(121℃,15min )

·干燥灭菌箱

·水浴锅

·超净工作台/生物安全柜

1、区别:保护对象不同

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·操作台内的灭菌设备

1、酒精灯;

2、红外线灭菌器;

3、电子火焰灭菌器;


·培养箱

1、一般恒温培养箱;

2、厌氧培养箱(厌氧培养罐)


二、微生物检测


01、常用标准


GB 4789.2-2022 食品安全国家标准 食品微生物学检验 菌落总数测定;

GB 4789.3-2016 食品安全国家标准 食品微生物学检验 大肠菌群计数;

GB 4789.15-2016 食品安全国家标准 食品微生物学检验 霉菌和酵母计数;

GB 4789.4-2016 食品安全国家标准 食品微生物学检验 沙门氏菌检验;

GB 4789.10-2016 食品安全国家标准 食品微生物学检验 金黄色葡萄球菌检验;

GB 4789.30-2016 单核细胞增生李斯特氏菌检验;


02、菌落总数测定


菌落总数 (aerobic plate count)

食品检样经过处理,在一定条件下(如培养基、培养温度和培养时间等)培养后,所得每mL(g)检样中形成的微生物菌落总数。


卫生学意义:

·食品的菌落总数严重超标,说明其产品的卫生状况达不到基本的卫生要求。

·加工、贮存运输过程中是否受到污染——卫生质量

·卫生学指标:菌落总数和致病菌有本质区别,必须配合其他病原菌项目的检验,才能作出比较全面准确的评定


计数和报告-结果报告

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注意事项


★必须做空白对照:监测培养基、平皿、稀释液的无菌程度。同时,应在工作台内打开一块空白PCA(其暴露时间应与检样时间相当),以了解样品在检验过程中有无受到来自环境的污染;

★水浴和倾注温度:46℃±1℃;

★培养条件:一般样品36℃±1℃/48h±2h,水产品(指原生态、未加工水产品)30℃±1℃/72h±3h;

★如样品(干调、面粉、脱水蔬菜)中可能含有在琼脂表面蔓延生长的菌落,可在凝固后的琼脂表面再覆盖一层(4mL)培养基;

★样品稀释液有时会带有细碎的食物颗粒(如奶粉、坚果),为避免这些颗粒与菌落发生混淆,可将样品稀释液与PCA混合,单做培养,置于4℃冰箱放置同样时间,以便在计数时作为对照。


大肠菌群测定


1、定义:

在一定培养条件下能发酵乳糖、产酸产气的需氧和兼性厌氧革兰氏阴性无芽胞杆菌。


该菌主要来源于人畜粪便,作为粪便污染指标评价食品的卫生状况,推断食品中肠道致病菌污染的可能。


这些细菌在生化及血清学方面并非完全一致。根据进一步的生化鉴定试验,可将大肠菌群细分为大肠埃希氏菌(俗称大肠杆菌)、弗氏柠檬酸杆菌、肺炎克雷伯氏菌和阴沟肠杆菌等。


2、检验原理:

MPN法:

是统计学和微生物学结合的一种定量检测法。待测样品经系列稀释并培养后,根据其未生长的最低稀释度与生长的最高稀释度,应用统计学概率论推算出待测样品中大肠菌群的最大可能数。


平板计数法:

大肠军群在固体培养基中发酵乳糖产酸,在指示剂的作用下形成可计数的红色或紫色,带有或不带有沉淀环的菌落


03、霉菌酵母计数


培养基的使用


▲两种培养基都含有氯霉素,可以抑制细菌的生长;


▲对氯霉素耐药的一些细菌在这两种培养基上也会生长,可以通过菌落形态来区分,或者通过染色镜检来判定;


▲如果需要分开报告霉菌和酵母菌的数量,主要通过菌落形态来区分。


细菌、酵母菌及霉菌的不同菌落形态


细菌:由于细胞小,形成的菌落较小,较薄、较透明、且有“细腻感”。可产生不同色素,菌落可呈现五颜六色且形态多样。

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酵母菌:由于细胞较大且不能运动,一般菌落比细菌大、厚且透明度差。产生色素较单一,通常乳白色,少数为橙红色,个别黑色。

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霉菌:菌落形态较大,质地疏松,外观干燥,不透明,呈现蛛网状、绒毛状、棉絮状或毡状;菌落与培养基间的联系紧密,不易挑起,菌落正面与反面、边缘与中心的颜色和构造常不一致。

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细菌、酵母菌及霉菌的镜检形态

细菌:包括三种基本形态,球状、杆状和螺旋状

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酵母菌:细胞通常有球状、卵圆状、椭圆状、柱状和香肠状

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霉菌:细胞构造与酵母菌相似,但以菌丝体形式存在

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